세포 시딩 프로토콜 (Cell seeding 하는 방법)

Cell Seeding Protocol

안녕하세요 오늘 적어두는 프로토콜은 

세포시딩을 할 때 사용하는 프로토콜인데요. 

제가 처음에 공부하면서 적어뒀던 

오래전 내용을 그대로 복사해왔습니다.

연구실에 따라서 내용에 따라서 차이가 있을 수도 있지만,

대부분은 아래와 같은 방식으로 세포를 시딩하지 

않을까 싶습니다. 하지만 세포 시딩을 어디에

하냐 따라서 방법은 차이가 발생할 수 있습니다.

(나노섬유에 시딩된 세포의 SEM 이미지)

저의 경우는 세포를 스캐폴드 (지지체)에 

심어서 얼마나 잘 자라는지 확인하는 과정을

위한 세포 시딩입니다. 이외에 세포를 키우면서

다른 플라스크로 배양을 하는 경우에

넣어주는 행위 역시 세포 시딩이라고 부를

수 있습니다.

(나노섬유에 시딩된 세포의 Confocal이미지)

 

Materials :

Trypsin, CO2 incubator, cell culture media, Centrifuger

 

 

Methods :

1. Scaffold 멸균 , ETOH에 Ethnaol 70% for 15~30min under UV light

2. PBS로 3번 for 10mins each under UV light

3. Cell Dish Medium suction

4. Cell Dish PBS로 세척(벽에 다가 PBS 쏴주고 돌리면서 씻어준다)

5. Trypsin(1X) 5ml씩 처리해서 pipetting

6. Incubation for 3mins

7. 기울여서 trypsin으로 원을 그리면서 씻어내듯이 (거품이 나지 않게)

8. 준비된 10ml medium에 넣는다

9. centrifuge 1200rpm for 3mins

10. 거품부터 suction 마지막에 기울여서 medium만 suction

11. new medium을 넣어주고 30~50times pipetting

12. 10ul를 두차례 cell counter에 넣는다(피펫팅해주면서)

13. cell counter기를 이용해서 4개의 칸을 새어주고 한 칸에 몇 개의 cell이 있는지 계산
    ex) 200/4 : 10ml x 104 = (2 x 104)(well에 따라 다름)x n

14. 필요한 cell만큼을 떼어내어 다시 centrifuge

15. 다시 5ml의 medium에 섞어 양을 조절한 후 양만큼 well에 넣는다.

16. cell attachment할 시간만큼 기다린 후에 medium을 넣어준다.

다음 번에 할 때 사진을 한 번 찍어봐야겠네요. :)